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Dr. Horrible, um aspirante a supervilão que tem seu próprio videoblog, está tentando entrar na prestigiada Evil League of Evil (liderada pelo lendário "puro-sangue do pecado", Bad Horse), mas seus planos são geralmente frustrados pelo super-herói egoísta Captain Hammer. A vida de Dr. Horrible se complica quando ele se apaixona por Penny, uma bonita e otimista defensora dos sem-teto, que ele conhece na lavanderia. A situação piora quando Penny começa a namorar o Captain Hammer, depois que ele aparentemente lhe salva a vida. Confrontado com a tarefa de ingressar na Liga, será que o Dr. Horrible consegue superar sua própria incompetência, vencer o herói e ainda conquistar a garota?